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cck8試劑正確的操作方案
發布時間:2018-04-23 點擊次數:871次
對于cck8試劑的使用想必不少用戶還不知道如何正確的進行操作,今天小編就告訴大家如何正確的操作cck8試劑吧
cck8試劑的操作說明
cck8試劑細胞活性檢測
1. 在96 孔板中接種細胞懸液 (100 ml /孔 ) 。將培養板放在培養箱預培養 (在37 ℃,5% CO2的條件下 )向每孔加入10 ml 的CCK- 8溶液 (注意不要在孔中生成氣泡,它們會影響 O.D值的讀數) 將培養板在培養箱內孵育 1-4小時。 4. 用酶標儀測定在450 nm處的吸光度 如果暫時不測定O.D值,打算以后測定的話,可以向每孔中加入 10 ml 0.1 M HCl溶液或者1% w/vSDS 溶液,并遮蓋培養板避光保存在室溫條件下。在 24小時內吸光度不會發生變化。
細胞增殖 -毒性檢測
1. 在96 孔板中配制 100 ml的細胞懸液。將培養板在培養箱預培養 24小時 ( 在37℃, 5% CO2的條件下 )向培養板加入10 ml不同濃度的待測物質將培養板在培養箱孵育一段適當的時間 (例如: 6,12, 24 或48小時 )向每孔加入10 ml cck8試劑 溶液 (注意不要在孔中生成氣泡,它們會影響 O.D值的讀數) 。 5. 將培養板在培養箱內孵育 1-4小時。 6. 用酶標儀測定在450 nm處的吸光度。如果暫時不測定O.D值,打算以后測定的話,可以向每孔中加入 10 ml 0.1 M HCl溶液或者1% w/vSDS 溶液,并遮蓋培養板避光保存在室溫條件下。在 24小時內吸光度不會發生變化。 注意:如果待測物質有氧化性或還原性的話,可在加 cck8試劑之前更換新鮮培養基,去掉藥物的影響。當然藥物影響比較小的情況可以不更換培養基,直接扣除培養基中加入藥物后的空白吸收即可。
cck8試劑制作標準曲線
1. 先用細胞計數板計數所制備的細胞懸液中的細胞數量,然后接種細胞。 2. 按比例 ( 例如:1/2比例 ) 依次用培養基等比稀釋成一個細胞濃度梯度,一般要做 3-5個細胞濃度梯度,每組3-6個復孔。
3. 接種后培養2-4 小時使細胞貼壁,然后加 cck8試劑試劑培養一定時間后測定 O.D值,制作出一條以細胞數量為橫坐標 (X軸) ,O.D值為縱坐標 (Y軸) 的標準曲線。根據此標準曲線可以測定出未知樣品的細胞數量 (使用此標準曲線的前提條件是實驗的條件要一致,便于確定細胞的接種數量以及加入 cck8試劑后的培養時間)。
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