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cck8試劑實驗過程中的疑難解答(一)
發布時間:2018-03-12 點擊次數:1031次
對于cck8試劑的使用相比于多用戶都充滿了疑惑,在實驗的過程中也經常會遇到一些難題,寸步難行,今天呢小編就總結下實驗中客戶常見問題相關疑問解答供大家參考下吧
1.cck8試劑與胸苷結合檢測之間是否有相關性?
有。然而,請注意由于cck8試劑使用的檢測原理與胸苷檢測的不同,因此結果可能不同。
2.cck8試劑能否檢測細菌細胞?
可以檢測E.coli,但不能檢測酵母細胞。向100 μl E.coli培養液中加入10 μl cck8試劑溶液,并培養1-4個小時或guo夜。
3.cck8試劑穩定嗎?
cck8試劑在0-5℃下能夠保存至少6個月,在-20℃下避光可以保存1年。如果需要長期保存,我們推薦-20℃的儲藏條件。
4.如果沒有450 nm的濾光片,還可以使用哪些其他濾光片?
還可使用450 nm到490 nm之間的濾光片。
5.如何減少由于cck8試劑在槍頭上或孔壁上的殘留所帶來的誤差?
可以在加樣前用培養基稀釋cck8試劑并混勻后加樣。
6.cck8試劑是什么顏色?
應該是粉紅色。若顏色不一樣,有可能會影響測定。
7.CCK8能否對活細胞進行染色?
不能。因為CCK8的主要成分是一種水溶性的四唑鹽 (WST8),并通過電子載體1Methoxy PMS將活細胞中的電子交換到培養基中的WST8上。由于生成的甲ā也是高度水溶性的,因此CCK8不能對細胞進行染色。
8.CCK8檢測溶液對細胞是否有毒?
CCK8溶液自身因為高濃度的1Methoxy PMS的存在而具有一點毒性。但是,加到培養基中的CCK8是沒有毒性的,因為被稀釋了10倍。因此,長時間的培養,如隔夜或者培養數天是可以的。同一個細胞培養液在CCK8檢測后還可以用于其他細胞增殖檢測,如結晶紫檢測,中性紅檢測或者DNA熒光檢測等。由于每種細胞對于CCK8的耐受力都不同,因此在需要進行長時間培養時,先檢測一下細胞在加入CCK8培養后的活力。
9.在做加藥實驗時,藥物對測定是否有影響?如何解決?
有時會有影響。如果藥物具有還原性,會和CCK8發生顯色反應,增加吸光度。解決辦法:首先要確認藥物是否有吸收,在含有藥物的培養基中加入CCK8,測定450 nm的吸光度,如果它的吸光度比不含藥物的培養基 (加CCK8)的吸光度高,則證明藥物有影響,可在加CCK8之前更換培養基,去掉藥物的影響。
10.每次測定的數值不一樣,是什么原因?如何解決?
可能會有以下幾個原因: 1. 當在培養箱內培養時,培養板zui外一圈的孔zui容易干燥揮發,由于體積不準確而增加誤差。 一般情況下,zui外一圈的孔只加培養基,不作為測定孔用。 2. 有可能會因為CCK8沾在壁上而產生誤差,建議在加入CCK8后,輕輕敲擊培養板以幫助混勻。 3. 每孔的細胞數量過多或過少。請預先在1,000100,000個/孔范圍內摸索條件。
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